Тут ми створили sCRAM (субоптимальний протоспейсерний сусідній мотив (PAM)-опосередкований РНК CRISPR і нуклеазою Cas12a в поєднанні з мультиензимною ізотермічною швидкою ампліфікацією), швидку діагностичну платформу-без екстракції, яка виявляє ASFV протягом 20 хвилин. sCRAM об’єднує етап швидкого вивільнення нуклеїнової кислоти (40 градусів, 5 хв) з реакцією в одній-пробірці, що поєднує мультиферментну ізотермічну ампліфікацію (MIRA) і субоптимальний PAM-опосередкований CRISPR/
Система Cas12a (37 градусів, 15 хв), що забезпечує-безкоштовне візуальне зчитування приладу за допомогою ультрафіолетового світла або смужок бічного потоку (LFS).sCRAM демонструє чутливість-виявлення однієї копії та не виявляє перехресної-реактивності з п’ятьма поширеними збудниками свиней (PRRSV, PPV, JEV, PCV та PRV). Оцінка 111 змодельованих і клінічних зразків (включаючи кров, плазму та мазки) показала 100% узгодженість з КПЦР для УФ-зчитування та 98,20% для ОРС
зчитування, при цьому обидва методи демонструють 100% специфічність. Простота, швидкість і можливість адаптації до польових умов sCRAM підкреслюють його потенціал для децентралізованого нагляду за вірусом АЧС в -обмежених умовах, пропонуючи потужний інструмент для стримування спалаху.
У цьому дослідженні ми розробили sCRAM, платформу для швидкого-розгортання в полі виявлення АЧС, яка об’єднує субоптимальний PAM-опосередкований CRISPR/Cas12a з мультиензимною ізотермічною ампліфікацією. Аналіз досягає чутливості до однієї-копії 1 копія/мкл протягом 20 хвилин і не виявляє перехресної-реактивності з основними патогенами свиней. Клінічна перевірка зразків крові, плазми та мазків продемонструвала повну відповідність із КПЦР за допомогою зчитування в УФ-світлі та точність 98,20 % за допомогою смужок для бічного потоку. Завдяки спрощеній роботі, високій чутливості та специфічності, а також візуальній інтерпретації результатів, sCRAM пропонує великий потенціал для -спостереження за ASFV на місці та ширшого --діагностичного застосування-догляду.
