Гострі дихальні інфекції - це звичайні дихальні захворювання у дітей, які часто викликані вірусами. Дихальний синцитіальний вірус (RSV) та дихальний аденовірус (ADV) - це два поширені збудники, що викликають гострі дихальні інфекції у дітей. Легкі випадки можуть спричинити загальні симптоми, як кашль та нежить, тоді як важкі випадки можуть спричинити важкі ускладнення, такі як пневмонія та отит. Відповідно до рекомендацій Всесвітньої організації охорони здоров'я, виявлення збудників має бути швидким, точним, чутливим та специфічним і не повинен покладатися на спеціалізовані техніки чи великі інструменти. Тому особливо важливо розробити метод виявлення для RSV та ADV, який може відповідати вищезазначеним вимогам виявлення.
Дослідницька група директора Ма Донглі Інституту педіатрії дитячої лікарні Шеньчжень опублікувала статтю "Мультиплексна рекомбіназна полімеразна аналізи в поєднанні з CRISPR/ CAS12A для виявлення вірусу синцитіалу дихання та аденовірусу респіраторів" у журналі "Наукові звіти", з фактором впливу 4.6.
Огляд досліджень
Мультизимерна ізотермічна технологія ампліфікації швидкої нуклеїнової кислоти MIRA поєднується з системою виявлення CRISPR/CAS. Розробляючи Mira Primers та CRISPR RNA (CRNAS), виконуючи кілька порівнянь послідовностей, оптимізуючи умови реакції та використовуючи пристрої чисельного виявлення флуоресценції для перевірки чутливості та специфічності.
І використовуючи результати QPCR як контроль порівняння, вивчали узгодженість результатів тестових результатів 160 зразків клінічного горла.
Експериментальні результати
1. Чутливість та специфічність методу виявлення mira-crispr/cas12a
У виявленні методу Міра пара праймерів RSV-F1/R1 використовується для ампліфікації нуклеїнових кислот із зразків тампон у горлі RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, FLUA або RSV/ADV. За винятком RSV та ADV, які мали ампліфіковані смуги, інші результати були негативними, що свідчить про те, що вибрані праймери Mira не перехресно реагували з іншими вісім випробуваних збудників і були добре збереглися.
Згодом рекомбінантні плазміди RSV та ADV розбавляли 10 разів за допомогою стерильної води, а межі виявлення для RSV та ADV були 106Копії/мл.
(1-10: Зразки тампон у пацієнтів з RSV, RSV/ADV ко-інфекцією та інших зразків дихального збудника відповідно)
2. Порівняйте з qPCR
Порівняно з методом QPCR, межі виявлення RSV та ADV - це 103 копії/мл
(Чутливість виявлення QPCR RSV та ADV)
Метод Mira-Crispr більш підходить для низових лабораторій, з коротким часом виявлення, простою експлуатацією та не потребою у масштабних інструментах QPCR для завершення експериментальних операцій.
3. Порівняння клінічних зразків
Зразки тампон у горлі збирали у 160 дітей з гострими респіраторними інфекціями. У той же час для виявлення використовували метод Mira-Crispr та метод QPCR, а результати порівнювали з результатами клінічних випробувань.
Порівняно з методом QPCR, чутливість методу Mira-Crispr для RSV та ADV становила 98,1% та 91,4% відповідно, а специфічність виявлення становила 1 0 0%. Значення KAPPA перевищує 0,95, що вказує на високий ступінь узгодженості.
Метод Mira-Crispr має переваги швидкого, чутливого та специфічного виявлення RSV та ADV. Він може швидко та точно виявляти вірусні інфекції, і є більш підходящим для використання в районах з дефіцитними медичними ресурсами.