Staphylococcus haemolyticus-це грампозитивна коагулаза-негативна бактерія, яка дуже часто зустрічається в лікарнях. Останніми роками інфекції, придбані в лікарні, приділяли все більшу увагу через їх більший ризик. Стафілокок Haemolyticus може ще більше спричинити шкірні інфекції, менінгіт, перитоніт і навіть сепсис. Затримки клінічної діагностики можуть призвести до погіршення стану здоров'я, тому швидка діагностика S. haemolyticus є ключовою для точного лікування.
Дослідницька група вчителя Джі Туо з центральної лабораторної кафедри Другої народної лікарні Ліаньюнгангу, Китай опублікувала статтю "Швидке і візуальне виявлення стафілокока Haemolyticus у клінічних зразках з MirA-LFS" в журналі "Analytica Chimica Acta", з фактором впливу 6.2.
1. Огляд досліджень
У цьому дослідженні був встановлений метод MIRA-LFS, заснований на гені MVAA для виявлення стафілокока Haemolyticus. Мультизимерна ізотермічна технологія ампліфікації швидкої нуклеїнової кислоти MIRA поєднувала з латеральною смугою випробувальної смуги LFS для швидкого виявлення збудника.
Експеримент проводився при 37 градусах, і результати можна було виявити протягом 9 хвилин. Чутливість виявлення була 0. 147CFU/Реакція.
Метод виявлення MIRA-LFS підходить для виявлення фіксованої точки стафілокока гемолітика в клінічних зразках, реалізуючи метод POCT для виявлення стафілокока гемолітики, який має велику цінність для швидкого діагностики та лікування захворювань у районах із недостатньо медичними послугами.
Дослідницька група використовувала MIRA-LFS, QPCR та традиційні методи бактеріальної культури для аналізу 95 випадкових клінічних зразків та підтвердили клінічну застосовність.
2. Методи досліджень
Схематична схема виявлення MIRA-LFS показана вище.
У дослідженні використовувались ізотермічний набори швидкого ампліфікаційного набору AMP-Future Biotech (тип випробувальної смуги колоїдної золота) та випробувальні смуги виявлення нуклеїнової кислоти.
Довжина праймера гена MVAA становить 30-35 нуклеотиди, а довжина продукту ампліфікації - 100-350 bp. Всього було розроблено 6 пар кандидатських праймерів. Аналіз Mira проводили за допомогою GDNA стандартних штамів гемолітики Staphylococcus, обстежували кандидатські праймери, а продукти ампліфікації демонстрували за допомогою 2% електрофорезу агарозного гелю.
Потім проектуйте зонд на основі послідовності передніх праймерів (розширюючи 16 bp назад). 5 'кінець зонда був позначений FITC, а 3' кінець був позначений блокуванням С3. Використовуйте THF для заміни 31 нуклеотиду в зонді. THF становить 30 bp від 5 'кінця і 15 bp від 3' кінця. 5 -дюймовий кінець вибраного зворотного праймера позначений біотином.
Більше того, дослідницька група оптимізувала умови реакції для виявлення MIRA-LFS стафілокока гемолітика. Тест з 37 градусами з інтервалом 2 хвилини з 4 до 12 хвилин. Результати відображаються в 8 хв. Крім того, тести проводяться з інтервалом 5 градусів від 22-52 ступеня. 37-42 Ступінь є найбільш підходящою температурою для виявлення MirA-LFS. Тому оптимальний час реакції та температура методу MIRA-LFS для стафілокока Haemolyticus-8 хв та 37 градусів відповідно. Разом з кінцевим результатом, який візуалізується LFS протягом 1 хвилини, загальний час виявлення становить 9 хвилин.
3. Експресіментальні результати
Перевірка чутливості
Аналіз Mira-LFS проводили на різних концентраціях геномної ДНК (GDNA), отриманої з серійно розведених культур Haemolyticus Staphylococcus (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Аналіз регресії ймовірнісної одиниці показав, що 95% LOD, визначений аналізом MIRA-LFS, становив 0. 147 CFU/реакція.
Перевірка специфіки
Аналізуючи 18 поширених патогенних мікробних штамів та 15 клінічних штамів Haemolyticus, визначали селективність виявлення MIRA-LFS стафілокока Haemolyticus. Результати показали, що тест MIRA-LFS був негативним для 18 інших патогенних бактерій та позитивним для 15 перевірених клінічних зразків стафілокока Haemolyticus.
Виявлення MIRA-LFS є високоелективним і підходить для скринінгу гемолітики Staphylococcus.
Фактичне тестування зразка
Лікарня другої народ Ліаньюнгнгу, випадковим чином зібрала 95 зразків, включаючи 35 зразків шкіри та м'яких тканин, 16 зразків сечі, 14 зразків мокротиння та 30 зразків крові.
Результати показали, що метод виявлення був на 100% відповідав методу QPCR. Крім того, порівняно із золотим стандартом (GB/T4789. 11-2003), чутливість та специфічність методу виявлення MIRA-LFS для ідентифікації інфекції гемолітичної інфекції стафілокока були відповідно 100% та 98,73%. Ці результати додатково перевірили технічну доцільність цього методу при виявленні гемолітики Staphylococcus у клінічних зразках.
Метод MIRA-LFS застосовується для швидкого виявлення POCT стафілокока гемолітика. Він є ефективним, точним, простим та недорогим, і допомагає приймати швидку діагностику та рішення щодо лікування.
Дізнайтеся про технологію Mira
Технологія ампліфікації з багатоотермальної швидкої нуклеїнової кислоти AMP-Future підсилює нуклеїнові кислоти при постійній температурі 39 градусів -42 ступінь, з часом реакції лише 5-20 хвилин. Крім того, суворі лабораторні умови не потрібні, а сценарії застосування є диверсифікованими: загальноприйнятих відділів лабораторії, первинна медична допомога, домашнє тестування, поля тощо.
Форми продукту реагенту різноманітні: висушений порошок, висушені заморожуванням, мікросфери, що висушені, тощо; Результати відображення різноманітні: гелевий електрофорез, крива флуоресценції, тест -смужки колоїдних золота тощо. Реагент має стабільну продуктивність, простий в експлуатації та зручний для зберігання та транспортування.
Завдяки MIRA як технології Core Platform, вона розробила низку допоміжних продуктів, таких як "технологія вивільнення ультрасвайної нуклеїнової кислоти", "двоканальний ізотермальний детектор флуоресценції", "інтегрована повністю автоматична система закритого виявлення", "пристрій виявлення нуклеїнової кислоти" тощо. Створюють загальне рішення для швидкого молекулярного виявлення.