Staphylococcus haemolyticus-це грампозитивна коагулаза-негативна бактерія, яка дуже часто зустрічається в лікарнях. В останні роки зростає занепокоєння через високий ризик інфекцій, придбаних у лікарні. Стафілокок Haemolyticus може ще більше спричинити шкірні інфекції, менінгіт, перитоніт і навіть сепсис. Затримки клінічної діагностики можуть призвести до погіршення стану здоров'я, тому швидка діагностика стафілокока Haemolyticus є ключовим для точного лікування.
Дослідницька група професора Джі Туо з кафедри Центральної лабораторії лікарні другої народної народ Ліаньюнг опублікувала статтю "Швидке та візуальне виявлення стафілокока Haemolyticus у клінічних зразках з Mira-LFS" в журналі "Analytica Chimica Acta", з фактором впливу 6,2.
Огляд дослідження
У цьому дослідженні група професора Джі Туо встановила метод виявлення стафілолітики Haemolyticus за допомогою MIRA-LFS на основі гена MVAA, і використовувала технологію постійної температури з багатоконежимами, що постійна температура, для досягнення швидкого виявлення патогенів. Експеримент проводили при 37 градусах, а результати були виявлені протягом 9 хв з чутливістю до виявлення 0. 147 CFU/реакція. Метод виявлення MIRA-LFS підходить для виявлення фіксованої точки стафілокока Haemolyticus у клінічних зразках, і реалізує метод ідентифікації стафілокока Haemolyticus за допомогою POCT, який має велику цінність для швидкої діагностики та лікування захворювань у незадоволених районах. Дослідницька група використовувала MIRA-LFS, QPCR та традиційні методи бактеріальної культури для аналізу 95 випадкових клінічних зразків та підтвердила клінічну застосовність.
Методи дослідження
Схематична схема тесту MirA-LFS показана вище. У цьому дослідженні була використана на комплект швидкого ампліфікаційного набору AMPFuture Biotech (тип випробувальної смужки колоїдної золотої смуги) та випробувальну смужку для виявлення нуклеїнової кислоти.
Довжина гена MVAA була 30-35 нуклеотидів, а довжина продукту ампліфікації була 100-350 BP, і загалом було розроблено 6 пар кандидатів. ГДНК стандартних стафілолітичних штамів Staphylococcus використовували для аналізу MIRA, обстежували праймери кандидатів, а ампліфіковані продукти візуалізували за допомогою 2% агарозного гель -електрофорезу.
(Продукти ампліфікації відображаються за допомогою електрофорезу агарозного гелю)
Потім зонд розроблений відповідно до послідовності передніх праймерів (16 bp назад). 5 'кінець зонда позначений FITC, а 3' кінець позначається C3. Нуклеотид положення 31- в зонді замінюється на THF на відстані 30 bp від кінця 5 'і 15 bp від 3' кінця. 5 -дюймовий кінець вибраного зворотного праймера позначений біотином.
(Схематична схема перехресної та послідовності модифікації комбінацій праймерів)
Крім того, оптимізовані умови реакції для виявлення MIRA-LF за допомогою Gaemolyticus Staphylococcus. Тести проводяться через 37 градусів від 4-12 хв через 2 хв. Результати показані за 8 хвилин реакції, а тестова лінія чітко видна. Крім того, тест проводиться з 22-52 градус з інтервалом 5 градусів. 37-42 Ступінь є найбільш підходящою температурою для виявлення MirA-LFS. Тому оптимальний час реакції та температура методу MIRA-LFS для стафілокока Haemolyticus становили 8 хв та 37 градусів відповідно. Разом з тим, що кінцевий результат візуалізується LFS протягом 1 хв, загальний час виявлення - 9 хв.
(Оптимізація часу та температури реакції)
Експериментальні результати
1. Перевірка чутливості
Різні концентрації геномної ДНК (GDNA), отримані з серійних розведення культур Gaemolytica Staphylococcus (1 0^6-10^0 cfu/ml), тестували на mira-lfs.
(Позитивний сигнал в різних концентраціях)
Аналіз регресії ймовірнісної одиниці показав, що 95% LOD, визначений аналізом MirA-LFS, становив 0. 147cfu/реакція.
(Обмеження обчислення виявлення)
2. Перевірка специфічності
Селективність виявлення MIRA-LFS визначали шляхом аналізу 18 штамів загальних патогенних мікроорганізмів та 15 штамів клінічного стафілокока Haemolyticus. Результати показали, що тест MIRA-LFS був негативним для всіх 18 інших патогенних бактерій та позитивним для 15 перевірених клінічних зразків стафілокока Haemolyticus.
(8 штамів стандартних патогенних бактерій та 15 штамів клінічного гемолітичного стрептокока, відповідно)
Аналіз Mira-LFS має високу селективність і підходить для скринінгу Gaemolyticus Staphylococcus.
3. Фактичне тестування зразків
Всього 95 зразків були зібрані випадковим чином з лікарні другого народ Ліаньюнг, включаючи 35 зразків шкіри та м'яких тканин, 16 зразків сечі, 14 зразків мокротиння та 30 зразків крові.
(95 клінічних зразків тестували різними методами)
Результати показали, що метод виявлення був на 100% відповідав методу QPCR. Крім того, порівняно із золотим стандартом (GB/T4789. 11-2003), чутливість та специфічність аналізу Mira-LFS для ідентифікації інфекції Haemolytica стафілокока були відповідно 100% та 98,73%. Ці результати додатково підтверджують технічну доцільність методу при виявленні стафілокока Haemolyticus у клінічних зразках.
Метод MIRA-LFS використовується для швидкого виявлення стафілокока Haemolyticus від POCT, який є ефективним, точним, простим та економічно ефективним, що корисно для швидкого діагностики та лікування.